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色譜柱常見(jiàn)操作維護
一、正確使用緩沖鹽
緩沖鹽通常易溶于水，難溶于有機溶劑，因此緩沖鹽使用不當會(huì )使其析出，堵塞填料基質(zhì)上的微孔和顆粒間的空隙，使填料板結，柱壓上升；同時(shí)阻礙了基質(zhì)上鍵合的碳鏈自由舒展，使色譜柱的保留能力下降，柱效降低。緩沖鹽析出后，去除非常困難，因此，正確的使用緩沖鹽對延長(cháng)色譜柱使用壽命非常重要。
正確使用緩沖鹽的目的是防止緩沖鹽析出，因此正確使用緩沖鹽的方法可歸結為一句話(huà)：使用前要過(guò)濾，使用后要沖洗。具體方法如下：
1、等度條件：使用緩沖鹽前和使用后需用過(guò)渡流動(dòng)相以1.0ml/min流速沖洗60min；使用后去除緩沖鹽的另一個(gè)方法是用過(guò)渡流動(dòng)相以0.2ml/min流速沖洗色譜柱。
2、梯度條件：用含有緩沖鹽的流動(dòng)相跑梯度之前，用與初始流動(dòng)相組成相同的過(guò)渡流動(dòng)相以1.0ml/min流速沖洗60min，再用該過(guò)渡流動(dòng)相以1.0ml/min沖洗色譜柱120min。含緩沖鹽流動(dòng)相的梯度設定應盡量平緩，以避免梯度過(guò)程中緩沖鹽析出。
注意：過(guò)渡流動(dòng)相是指有機相和水相的組成與分析流動(dòng)相相同，區別只是過(guò)渡流動(dòng)相不含緩沖鹽。
3、緩沖鹽析出的補救方法：
1）方案1：用甲醇/20/80以1.0ml/min流速35攝氏度條件下反向沖洗色譜柱120min
2）方案2：用甲醇/水=20/80以0.2ml/min流速反向沖洗色譜柱。
二、防止強保留物質(zhì)在色譜柱上存留
強保留物質(zhì)和大分子化合物在色譜柱中累積，對樣品中的化合物產(chǎn)生額外的保留行為，不僅引起峰型變寬、拖尾，使柱效下降，同時(shí)也會(huì )引起保留時(shí)間的變化，累積到一定程度時(shí)還會(huì )導致柱壓升高。由于強保留物質(zhì)和大分子化合物對色譜分離的影響是一個(gè)累積效應，需要一定的時(shí)間才會(huì )體現出來(lái)，但對許多藥品特別是復雜樣品而言，很難判斷其是否是含有強保留物質(zhì)，因此要防止強保留物質(zhì)的累積，需要在每天的日常維護中用純甲醇或乙氰清洗色譜柱。 clin-lab.com
清洗方法：
1、未使用緩沖鹽：每天分析完成后，先用上述方法除去緩沖鹽，然后再用甲醇或乙氰反向沖洗色譜柱60min。
2、使用過(guò)緩沖鹽：分析完成后，先用上述方法除去緩沖鹽，然后在用純甲醇或乙氰反向沖洗色譜柱60min
3、補救方法：
水——乙氰——氯仿（或異丙醇）——乙氰——水
每一步以1.0ml/min流速反向沖洗色譜柱60min。
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