一、 流動(dòng)相溶劑的選擇

1.所選用的流動(dòng)相溶劑要有一定的化學(xué)穩定性，不與固定相和樣品組分起反應，其純度和化學(xué)特性必須滿(mǎn)足色譜過(guò)程的穩定性和重復性的要求。

2.溶劑應當不干擾檢測器的工作，溶劑應與檢測器匹配，選擇不影響檢測器正常工作應選擇在測定波長(cháng)范圍內無(wú)吸收的流動(dòng)相。

3.在制備分離中, 溶劑應當易于除去, 不干擾對分離組分的回收。

4.溶劑的粘度要小，保證合適的柱壓降。

5.從實(shí)用角度考慮，溶劑應當價(jià)格低廉，容易購得，使用安全，純度要高。

二、流動(dòng)相溶劑使用的注意事項

1.流動(dòng)相溶劑應選擇HPLC的溶劑或依此為標準的溶劑。流動(dòng)相使用前用0.45μm濾膜過(guò)濾、脫氣，清除微粒和灰塵。 在送液泵內，為了防止雜物（固體）進(jìn)入流路，裝有吸濾器，但網(wǎng)孔徑為10μm，比此更小的顆粒仍然可通過(guò)，這會(huì )導致流路和柱子堵塞和污染。為此，建議常用0.45μm濾膜過(guò)濾。流動(dòng)相溶劑須經(jīng)脫氣，如不脫氣，在溶劑混合時(shí)，或壓力溫度變化時(shí)容易產(chǎn)生大量氣泡，會(huì )導致泵誤動(dòng)作和輸液不暢，檢測器產(chǎn)生噪聲信號等。

2.流動(dòng)相恢復到室溫后使用。流動(dòng)相溫度與室溫相差時(shí)，流動(dòng)相在恢復到室溫前，基線(xiàn)水平很難穩定，特別是發(fā)生漂移，也容易產(chǎn)生氣泡等現象。水與有機溶劑混合時(shí)，混合液變化大，往往會(huì )與室溫相差很大，務(wù)必注意。

3.做HPLC流動(dòng)相的試劑應用HPLC級的、水應用二次蒸餾水，水相流動(dòng)相需經(jīng)常更換，防止長(cháng)菌變質(zhì)。使用去離子水、針劑水、純凈水（炊用）并不合適、尤其是做梯度洗脫時(shí)，水中的不純物會(huì )成為鬼峰，從而干擾分析結果。

4.流動(dòng)相的pH值過(guò)高或過(guò)低，流動(dòng)相使用純水，使用高濃度磷酸鹽緩沖溶液，使用離子對試劑等，均可能造成色譜柱填料被化學(xué)破壞，這種對色譜柱固定相及鍵合相的破壞通常是不可修復的

5.用緩沖鹽做流動(dòng)相時(shí)，在使用前和使用后都要用水清洗流路，禁止將緩沖溶液留在流路中靜置或更長(cháng)時(shí)間。

6.若需要使用含鹽的流動(dòng)相，使用前請過(guò)濾。并且使用該含鹽流動(dòng)相前，色譜柱需先用低比例有機相（有機相含量應不低于10%）的溶液沖洗，以免緩沖鹽析出。流動(dòng)相若為蒸餾水或含鹽的緩沖液，建議現用現配，以免流動(dòng)相因滋生微生物而造成柱填料的污染。

7.進(jìn)行梯度實(shí)驗時(shí)要注意梯度變化過(guò)程中流動(dòng)相的互溶性，避免因流動(dòng)相不互溶而導致的緩沖鹽析出問(wèn)題。反相系統更換正相系統或正相系統更換反相系統時(shí)，用異丙醇置換系統內的儲存流動(dòng)相后在接柱子。

8.在更換兩種互不相溶的流動(dòng)相時(shí)，中間要用異丙醇溶液清洗過(guò)渡。例如：先用甲醇水做流動(dòng)相，然后在用正己烷做流動(dòng)相時(shí)，一定要先用異丙醇溶液沖洗甲醇水，然后用正己烷沖洗異丙醇，反之也是一樣。在更換流動(dòng)相時(shí)還要考慮色譜柱是否更換。

9.儀器在短期（兩三天）不用時(shí)，流路中可以是甲醇或水。儀器在長(cháng)期不用時(shí)，流路中應用甲醇。

10.對于UV等檢測器用于高靈敏度檢測時(shí)，要使用UV吸收性小的HPLC的溶劑作為流動(dòng)相溶劑，如甲醇、乙腈等。

11.當流動(dòng)相溶劑為乙腈時(shí)，流速為1ml/min泵的正常壓力5～7Mpa之間，如果壓力逐漸降低，基線(xiàn)也出現異常。這是由于乙氰的粘性大，導致泵的流速降低?？蛇m當提高流速使泵的壓力恢復正常即可。

12.流動(dòng)相含有濃硫酸、濃硝酸、二氯乙酸、二氯甲烷、丙酮、四氯呋南、二甲化砜等溶劑，會(huì )對流路中的PEEK樹(shù)脂管路強度變成差、PEEK樹(shù)脂管容易破裂使溶劑外濺。流動(dòng)相含有鹵素離子的溶劑，如KCI、NaCI、NH4CI等。對流路中的不銹鋼材料有腐蝕作用，以上的溶劑須盡量避免使用。非用不可時(shí)，分析完了后，應立刻用蒸餾水把全流路清洗干凈。

13.用于檢定梯度等性能時(shí)，短時(shí)間使用在0.5%以下的低濃度丙酮水溶液是沒(méi)有問(wèn)題的。

14.注意：稀硝酸與甲醇不能混合，否則有可能會(huì )引起爆炸。

三、液相色譜流動(dòng)相的貯存

流動(dòng)相一般貯存于玻璃、聚四氟乙烯或不銹鋼容器內，不能貯存在塑料容器中。因許多有機溶劑如甲醇、乙酸等可浸出塑料表面的增塑劑，導致溶劑受污染。這種被污染的溶劑如用于HPLC系統，可能造成柱效降低。貯存容器一定要蓋嚴，防止溶劑揮發(fā)引起組成變化，也防止氧和二氧化碳溶入流動(dòng)相。

磷酸鹽、乙酸鹽緩沖液很易長(cháng)霉，應盡量新鮮配制使用，不要貯存。如確需貯存，可在冰箱內冷藏，并在3天內使用，用前應重新濾過(guò)。容器應定期清洗，特別是盛水、緩沖液和混合溶液的瓶子，以除去底部的雜質(zhì)沉淀和可能生長(cháng)的微生物。因甲醇有防腐作用，所以盛甲醇的瓶子無(wú)此現象。