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1.液相系統沒(méi)有平衡好,柱子里的流動(dòng)相一直在變化,在檢測器里面的吸收就會(huì )一直變化,導致基線(xiàn)波動(dòng)的發(fā)生;梯度時(shí)如果其實(shí)比例的流動(dòng)相平衡時(shí)間過(guò)短也會(huì )造成基線(xiàn)波動(dòng);
2.實(shí)驗室環(huán)境不穩定(比如溫度忽高忽低,氣流不斷變化等),這對于沒(méi)有柱溫箱或只有單向溫度變化的HPLC儀器的影響尤其明顯;即使有比較好的柱溫箱時(shí),也要注意別讓空調的出風(fēng)口一直對照儀器吹,那樣基線(xiàn)也可能會(huì )波動(dòng);此外實(shí)驗室有電磁干擾時(shí),也有可能會(huì )導致此問(wèn)題的發(fā)生;
3.檢測器的流通池被污染,造成吸收的不恒定,此時(shí)需要清洗流通池;
4.檢測器燈能量不足時(shí),吸收會(huì )變得不穩定,這時(shí)基線(xiàn)一般也不穩定,特別是在低波長(cháng)處尤為明顯;
5.當使用低波長(cháng)檢測時(shí),有時(shí)流動(dòng)相會(huì )使用兩相或以上的等度,這時(shí)混合器的很小的混合比例的誤差都會(huì )被放大,很有可能會(huì )使基線(xiàn)發(fā)生波動(dòng),這時(shí)將流動(dòng)相按比例混合到一個(gè)通道里時(shí),一般都會(huì )使情況改善很多;
6.流動(dòng)相里的有機相的截止波長(cháng)要大于檢測波長(cháng)20nm以上,這一點(diǎn)切記,比如甲醇的截止波長(cháng)是210nm,乙腈是190nm。當使用230nm以下的檢測波長(cháng)時(shí),如果條件允許,使用乙腈,可以避免基線(xiàn)波動(dòng),其余類(lèi)推;
7.儀器出現問(wèn)題也會(huì )造成基線(xiàn)波動(dòng),比如(1)流動(dòng)相過(guò)濾頭堵塞、入口主動(dòng)閥濾芯污染、單向閥被污染物堵塞、泵頭有氣泡、比例閥出故障、系統流路漏液,比如管路裂開(kāi)、peek接頭沒(méi)*連上色譜柱而導致的泄露等;
8.沒(méi)有脫氣機的儀器,當流動(dòng)相未脫氣或脫氣未*時(shí),基線(xiàn)也會(huì )波動(dòng);有脫氣機的每次使用前都要檢查一下是否正常工作;
9.當大家使用梯度作為組分洗脫方式的時(shí)候,有條件的使用超純水,磷酸鹽、三乙胺等固體液體加入試劑也使用HPLC級別的,因為在梯度中隨著(zhù)有機相(洗脫力較強)的不斷增加,流動(dòng)相系統里的雜質(zhì)會(huì )在基線(xiàn)上反映出來(lái),導致出現鬼峰或基線(xiàn)波動(dòng);
10.流動(dòng)相中的有機相和緩沖液的比例一定要注意調配好,緩沖液的比例不能過(guò)大,要不然會(huì )出現緩沖鹽在柱子里析出的情況,這樣不但會(huì )造成基線(xiàn)波動(dòng)的發(fā)生,甚至會(huì )造成色譜柱毀壞;
11.當色譜柱被污染時(shí),也會(huì )造成基線(xiàn)波動(dòng),這里尤其要注意的是大家在做合成中控實(shí)驗的時(shí)候,不要用合成的原始反應液直接進(jìn)樣,因為原液里面有很多非極性或極性很小的化合物,一旦進(jìn)入到反相色譜柱里和非極性的C18發(fā)生相互作用,很可能就洗脫不下來(lái)使色譜柱變性或者慢慢的被洗脫下來(lái),造成以后的分析出現不穩定的鬼峰或者基線(xiàn)波動(dòng);
12.一些比較老的液相儀對電壓要求很高,電壓有點(diǎn)起伏檢測器就會(huì )反映教明顯,比如老的惠普和島津等儀器,這時(shí)需要配一個(gè)穩壓電源來(lái)解決此問(wèn)題;此外儀器和電腦之間連接的數據線(xiàn)出問(wèn)題或老化也可能會(huì )使基線(xiàn)波動(dòng)。