保留時(shí)間不重現有兩種不同的情況：即保留時(shí)間漂移和保留時(shí)間波動(dòng)。前者是指保留時(shí)間僅沿單方向發(fā)生變化，而后者指保留時(shí)間無(wú)固定規律的波動(dòng)。將此兩種情況區分開(kāi)來(lái)對找到問(wèn)題的原因往往很有幫助。如，保留時(shí)間的漂移往往由柱老化引起；而柱老化不可能引起保留時(shí)間的無(wú)規律波動(dòng)。事實(shí)上，保留時(shí)間漂移的多半原因是不同機理的色譜柱老化，如固定相流失（例如通過(guò)水解），色譜柱污染（由樣品或流動(dòng)相所致）等。保留時(shí)間漂移的幾種zui常見(jiàn)的原因如下：

 一 色譜柱平衡

 如果我們觀(guān)察到保留時(shí)間漂移，首先應考慮色譜柱是否已用流動(dòng)相*平衡。通常平衡需要10-20個(gè)柱體積的流動(dòng)相，但如果在流動(dòng)相中加入少量添加劑（如離子對試劑）則需要相當長(cháng)的時(shí)間來(lái)平衡色譜柱。

 流動(dòng)相污染也可能是原因之一。溶于流動(dòng)相中的少量污染物可能慢慢富集到色譜柱上，從而造成保留時(shí)間的漂移。應注意：水是很容易污染的流動(dòng)相成分。

 二 固定相穩定性

 固定相的穩定性都是有限的，即使在推薦的PH范圍內使用，固定相也會(huì )慢慢水解。例如，硅膠基質(zhì)在pH4時(shí)水解穩定性。水解速度與流動(dòng)相類(lèi)型和配體有關(guān)。雙官能團配體和三官能團配體比單官能團配體的鍵合相要穩定；長(cháng)鏈鍵合相比短鏈鍵合相穩定；烷基鍵合相比氰基鍵合相穩定的多。

 經(jīng)常清洗色譜柱亦會(huì )加速色譜柱固定相的水解。其他硅膠基質(zhì)鍵合相在水溶液環(huán)境中也可以發(fā)生水解，如氨基鍵合相等。

 三 色譜柱污染

 保留時(shí)間漂移的另一個(gè)常見(jiàn)原因是色譜柱污染。HPLC色譜柱是非常有效的吸附性過(guò)濾器，它可以過(guò)濾并吸附流動(dòng)相攜帶的任何物質(zhì)。污染源可以是：流動(dòng)相本身，流動(dòng)相容器，連接管、泵、進(jìn)樣器和儀器密封墊，以及樣品等。通常通過(guò)實(shí)驗可判斷污染的來(lái)源。

 樣品中如果存在色譜柱上保留很強的組分，就可能是使保留時(shí)間漂移的潛在根源。這些根源通常是樣品基質(zhì)。如：配藥中的賦形劑，生化樣品（如血清）中的蛋白及類(lèi)脂類(lèi)化合物，食品樣品中的淀粉，環(huán)境水樣中的腐殖酸等。通常樣品中的強保留組分具有較高的分子量，在此情況下，保留時(shí)間漂移的同時(shí)或其后會(huì )有反壓的增加?？梢酝ㄟ^(guò)使用固相提?。⊿PE）等樣品前處理方法來(lái)去除樣品基質(zhì)的影響。

 避免色譜柱污染zui簡(jiǎn)單的方法是防患于未然。相比之下，找到問(wèn)題的所在并設計有效的清洗步驟以去除污染物要困難的多。通常使用在給定色譜條件下的強溶劑，但并非所有污染物都可以在流動(dòng)相中溶解。如THF可去除反相色譜柱中的許多污染物，但蛋白在THF中就不能溶解。DMSO常常用于去除反相色譜柱中的蛋白。使用保護柱是個(gè)非常有效的方法。反沖色譜柱僅是不得已時(shí)采用的辦法。

 四 流動(dòng)相組成

 流動(dòng)相組成的緩慢變化也是保留時(shí)間漂移的常見(jiàn)原因。如流動(dòng)相中易揮發(fā)組分的揮發(fā)及循環(huán)使用流動(dòng)相等。

 五 疏水坍塌

 當小孔徑、端基封口良好的反相填料色譜柱使用接近100%的水為流動(dòng)相時(shí)，有時(shí)會(huì )發(fā)生分離突然喪失及被分析物質(zhì)保留明顯降低或*不保留的現象，這就是疏水坍塌。挽救的辦法實(shí)現用含大量有機組分的流動(dòng)相浸潤固定相，再用高水含量的流動(dòng)相進(jìn)行平衡。由是色譜柱長(cháng)期儲存也會(huì )發(fā)生此現象。