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首頁(yè) > 技術(shù)與支持 > 峰形后拖尾的原因
峰形后拖尾的原因
點(diǎn)擊次數:2189 更新時(shí)間:2018-03-20

[柱物理?yè)p壞]

      色譜柱有物理?yè)p壞是造成峰形拖尾的根源。*的解決方法就是更換新柱。

[柱內填料污染]

      流動(dòng)相和樣品中的雜質(zhì)是色譜柱主要污染源。

      流動(dòng)相所用的各種溶劑至少是分析純,盡量使用色譜純試劑。流動(dòng)相所用的水是超純水或全玻璃器皿雙蒸水。用前先用0.45um溶劑微孔過(guò)濾(器)過(guò)濾,除去可能存在的微粒。流動(dòng)相建議現用現配,對于含鹽的溶液尤其注意長(cháng)置會(huì )產(chǎn)生細菌或出現沉淀。此外還得保證儲存流動(dòng)相的容器清潔。

      復雜樣品可選用0.45um溶劑微孔過(guò)濾(器)或樣品預處理柱對樣品進(jìn)行預處理,確保樣品中不含微粒雜質(zhì)。若樣品不便處理,要使用保護柱。

      柱內填料污染時(shí),可將柱頭螺絲卸下,用工具挖出柱內前段被污染填料,再以相同的填料重新填入,修復?;蛞阅苋芙馕廴疚锏牧鲃?dòng)相按色譜柱使用的相反方向,沖洗色譜柱(約20至30倍柱體積,或視具體情況而定;另外,此時(shí)不能接檢測器),將污染物沖出色譜柱,再按色譜柱標明的使用方向使用。

[柱進(jìn)口處有異物]

      當斷定是柱進(jìn)口處有異物時(shí),可將柱頭螺絲卸下,取出濾帽并將其置于20%硝酸溶液中,用超聲波清洗約20分鐘,再置于超純水中,并用超聲波清洗約10分鐘,重新裝入色譜柱內即可。

[樣品濃度過(guò)高致使柱超載]

       樣品在柱上超載能引起峰展寬,拖尾(或伸舌)。

       適當減小進(jìn)樣量或樣品濃度(需要時(shí),可提高檢測器靈敏度)直至峰形和保留時(shí)間不再改變,便可消除這種不良影響。減小進(jìn)樣量還能改善其分離度。正常情況下,樣品中每種化合物在150×4.6mm柱中進(jìn)樣量保持在3~50ug范圍內,不會(huì )引起明顯超載。

[樣品溶劑不對]

      選擇合適的樣品溶劑,以排除不必要的干擾。選用流動(dòng)相溶解樣品。

[柱外效應]

      柱外效應(即進(jìn)樣閥、色譜柱及檢測器間的管路過(guò)長(cháng)、直徑過(guò)粗、管路接頭不匹配、有死體積)是影響色譜柱柱效的主要因素之一。所以在可能的條件下,色譜柱的兩端連接管路要盡可能短,連接管內徑盡可能細小,切口務(wù)必平整光滑,盡可能的減小死體積,以防止因樣品擴散造成不能反映色譜柱真實(shí)柱效等情況發(fā)生。

[緩沖不足或不合適]

      在緩沖不好或離子強度過(guò)低的分離中,也會(huì )出現保留時(shí)間重現性差和峰形拖尾。增加緩沖濃度(與樣品大小相匹配)能改善此情況。

[硅醇基團作用]

      仔細分析色譜柱內填料表面性質(zhì)可知:反相色譜柱填料的表面大約被鍵合相覆蓋了一半,其余的就是未被鍵合的硅醇基團。所謂的保留是指樣品分子與鍵合相相互作用的結果。但是,酸性或堿性化合物與硅膠表面殘存的硅醇基團或金屬雜質(zhì)之間相互作用而引起雙重保留機理,因此,發(fā)生了峰形拖尾。

      為了減小峰形拖尾,通??稍诹鲃?dòng)相加入25mM三乙胺(抑制劑)。三乙胺能與硅醇基團發(fā)生強烈的相互作用,從而降低或阻斷樣品分子與硅醇基團的作用,以保證保留機理正常進(jìn)行,并大大緩解了峰形拖尾。使用長(cháng)鏈的硅醇基抑制劑,雖起效較慢,但持續力較三乙胺長(cháng)。因為抑制劑分子中除了胺基與硅醇基團發(fā)生極性作用外,大分子中非極性部分與固定相也會(huì )發(fā)生反相作用而產(chǎn)生保留現象。如果將抑制劑加至樣品中,效果會(huì )顯著(zhù)。

[柱內金屬污染]

      柱內金屬污染(Fe,Ni等)可引起某引些化合物峰形拖尾。金屬可由填料本身帶進(jìn),也可由腐蝕性流動(dòng)相緩慢溶解柱進(jìn)口的金屬濾片,隨流動(dòng)相沉積到柱填料中。例如C18柱填料被金屬污染后,造成酸性/堿性樣品拖尾,可用堿洗/酸洗后再鍵合的填料,得到的峰是尖銳且對稱(chēng)的。

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