產(chǎn)品列表PRODUCTS LIST
每天用足夠的時(shí)間來(lái)維護色譜柱,您將節省更多用于處理色譜柱故障的時(shí)間,同時(shí)您的色譜柱的壽命也會(huì )變得更長(cháng)!色譜柱的使用壽命,除了與所分析的樣品和流動(dòng)相及使用頻率有關(guān)外,zui主要的是與日常的維護密切相關(guān)。 色譜柱的使用壽命主要是根據柱效和柱壓兩個(gè)指標來(lái)衡量,如果一支色譜柱柱效太低或柱壓太高,通常被認為該色譜 柱的使用壽命已經(jīng)結束。因此,延長(cháng)色譜柱使用壽命的關(guān) 鍵是,消除引起柱效下降和柱壓升高的因素。
一、流動(dòng)相的pH值
由于硅膠基質(zhì)的填料中存在Si-C和Si-O鍵,流動(dòng)相超過(guò)其pH范圍將會(huì )導致硅膠基質(zhì)溶解和鍵合相碳鏈斷裂,使柱效下降,壽命變短。由于流動(dòng)相的pH控制不當而對色譜柱造成的損害,通常很難使色譜柱恢復,因此必須認真對待,嚴格控制流動(dòng)相的pH值。。
二、去除樣品和流動(dòng)相中的固體顆粒
樣品和流動(dòng)相中含有的固體顆粒物質(zhì)會(huì )堵塞色譜柱篩板,篩板被堵不僅會(huì )引起柱壓升高,而且也會(huì )引起柱效下降,因為篩板的堵塞會(huì )引起液流不均,導致色譜峰形拖尾、變寬,甚至出現雙峰,從而使柱效下降。因此,建議使用超純水和色譜純試劑,在分析前對樣品進(jìn)行超聲、針筒過(guò)濾,流動(dòng)相過(guò)0.45µm 濾膜,尤其是流動(dòng)相加入了緩沖鹽(如NaH2PO4等),必須過(guò)濾。
三、使用保護柱或在線(xiàn)過(guò)濾器
樣品和流動(dòng)相經(jīng)過(guò)濾后并不能*消除固體顆粒物質(zhì),因為泵的磨損、密封圈和管路的老化也會(huì )產(chǎn)生固體顆粒物,這些固體顆粒被流動(dòng)相帶入色譜柱,堵塞篩板,導致柱壓升高、柱效下降。保護柱和在線(xiàn)過(guò)濾器上都有篩板,其孔徑與色譜柱篩板孔徑相同,因此可以阻止固體顆粒物質(zhì)到達色譜柱,有效防止色譜柱篩板的堵塞。由于柱壓升高在分析故障中占很大比例,因此,除對樣品和流動(dòng)相進(jìn)行過(guò)濾外,建議您在色譜柱進(jìn)樣端加上保護柱或在線(xiàn)過(guò)濾器。
四、正確使用緩沖鹽
緩沖液可以提供離子平衡的反離子,并使流動(dòng)相保持一定的離子強度和p H 值,減少拖尾。緩沖鹽通常易溶于水,難溶于有機溶劑,因此緩沖鹽使用不當會(huì )致其析出,堵塞填料基質(zhì)上的微孔和顆粒間的空隙,使填料板結,柱壓上升;同時(shí)阻礙了基質(zhì)上鍵合的碳鏈自由舒展,使色譜柱的保留能力下降,柱效降低。緩沖鹽析出后,去除非常困難,因此,正確的使用緩沖鹽對延長(cháng)色譜柱使用壽命非常重要。
正確使用緩沖鹽的目的是防止緩沖鹽析出,因此正確使用緩沖鹽的方法可歸結為一句話(huà):使用前要過(guò)渡,使用后要沖洗。
具體方法如下:
1.等度條件:使用緩沖鹽前用過(guò)渡流動(dòng)相以1.0mL/min 流速沖洗20-30倍柱體積,然后再使用含有緩沖鹽的流動(dòng)相;使用后去除緩沖鹽的方法是用過(guò)度流動(dòng)相以1.0mL/min流速沖洗30倍柱體積,然后以純有機溶液沖洗30倍柱體積保存。
2.梯度條件:用含有緩沖鹽的流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫之前,用與初始流動(dòng)相組成相同的過(guò)渡流動(dòng)相以1.0mL/min流速沖洗30倍柱體積,再開(kāi)始梯度的運行;分析完成后,再用過(guò)渡流動(dòng)相以1.0mL/min沖洗色譜柱30倍柱體積,然后以純有機溶液沖洗30倍柱體積保存。
五、另外,在使用緩沖液的過(guò)程中還要注意以下幾點(diǎn):
1.避免使用鹽酸鹽,鹽酸鹽對鋼質(zhì)有腐蝕作用;
2.緩沖液要現配現用,往往緩沖液是良好的菌類(lèi)培養液,隔天或放置長(cháng)時(shí)間實(shí)驗時(shí)會(huì )發(fā)生很多怪現象;
3.使用緩沖液要及時(shí)掌握pH范圍,做到胸中有數;
4.清洗液路和柱子時(shí),有溫控可加熱到30攝氏度易于沖洗;
5.長(cháng)時(shí)間用緩沖溶液要注意觀(guān)察接頭處有無(wú)析出,若有白色鹽類(lèi)析出,定期用10%硝酸沖洗液路(拆下柱子,沖洗30mL10%硝酸溶液,再用5倍水沖洗)可以避免液路的堵塞;
6.選擇緩沖液要用可靠的試劑,避免不純的鹽類(lèi)造成不必要的麻煩;
過(guò)渡流動(dòng)相是指有機相和水相的組成與分析流動(dòng)相相同,但是不含緩沖鹽的溶液。
六、防止強保留物質(zhì)在色譜柱中存留
強保留物質(zhì)和大分子化合物在色譜柱中累積,對樣品中的化合物產(chǎn)生額外的保留行為,不僅引起峰形變寬、拖尾,使柱效下降,同時(shí)也會(huì )引起保留時(shí)間的變化,累積到一定程度時(shí)還會(huì )導致柱壓升高。由于強保留物質(zhì)和大分子化合物對色譜分離的影響是一個(gè)累積效應,需要一定的時(shí)間才會(huì )體現出來(lái),但對許多樣品特別是復雜樣品而言,很難判斷其是否含有強保留物質(zhì),因此要防止強保留物質(zhì)的累積,需要在每天的日常維護中用純甲醇或乙腈30倍柱體積清洗色譜柱。
七、色譜柱的再生
1.反相柱
以下列溶劑順序沖洗30倍柱體積
乙腈-水(5:95) → 四氫呋喃 → 乙腈-水(5:95)
2.正相柱
以下列溶劑順序沖洗30倍柱體積
正己烷 → 二氯甲烷 → 異丙醇 → 二氯甲烷 → 流動(dòng)相
3.硅膠柱(Silica)除水
30mL 2.5% 2,2 二甲氧基丙烷和2.5%冰醋酸正己烷溶液沖洗柱子