液相色譜柱的選擇與清潔說(shuō)明
點(diǎn)擊次數：1191 更新時(shí)間：2020-05-12
液相色譜柱的液相色譜(HPLC)技術(shù)是20世紀60年代后期發(fā)展起來(lái)的一種分離分析技術(shù)，是現代分離和測定的重要手段。自問(wèn)世以來(lái)，它以其分離效率高、分析速度快、檢測靈敏度高、沸點(diǎn)高但不能汽化熱不穩定的生理活性物質(zhì)等優(yōu)點(diǎn)，在生物化學(xué)、醫學(xué)和臨床分析等領(lǐng)域得到了廣泛的應用。液相色譜柱作為一種消耗品，隨著(zhù)使用時(shí)間的延長(cháng)或注射次數的增加，色譜峰高減小，峰寬增大或肩峰出現，柱效應減小。需要定期進(jìn)行*的清洗和再生，并且不同的柱清洗方法也不同。如C8柱、C18柱的清洗：
液相色譜儀常用的C8柱、C18柱。當流動(dòng)相僅為乙腈-水或甲醇-水時(shí)，流速1.0ml/min沖洗30min，，柱溫保持實(shí)驗時(shí)的溫度。
水相中有無(wú)機鹽、表面活性劑或三乙胺、高氯酸等物質(zhì)時(shí)，先采用純水(或含有2%甲醇)，沖洗A管路(實(shí)驗中采用的管路)，時(shí)間30min(如流動(dòng)相中有表面活性劑，則適當增加時(shí)間)，流速1.0ml/min，柱溫可較實(shí)驗溫度高出5~10℃。隨后更換成20%甲醇再沖洗30min，流速不變，柱溫箱加熱裝置關(guān)閉。結束后取下色譜柱放置陰涼處。
實(shí)踐證明沒(méi)必要采用高比例的甲醇沖洗，因為殘余有機相中的水相遇到高比例甲醇后在泵頭上、色譜柱中會(huì )析出少量鹽和表面活性劑，導致色譜柱壽命縮短。
對于液相色譜柱的選擇要注意：
1.PH值使用范圍
硅膠為基質(zhì)填料，使用時(shí)一定要注意流動(dòng)相的PH范圍。一般的C18柱PH值范圍都在2-8，流動(dòng)相的PH值小于2時(shí)，會(huì )導致鍵合相的水解；當PH值大于7時(shí)硅膠易溶解；經(jīng)常使用緩沖液固定相要降解。一旦發(fā)生上述情況，色譜柱入口處會(huì )塌陷。同樣填料各種不同牌號的色譜柱不盡相同。如果流動(dòng)相PH較高或經(jīng)常使用緩沖液時(shí)，建議選擇PH范圍大的柱子。
2.填料的端基封尾
把填料的殘余硅羥基采用封口技術(shù)進(jìn)行端基封尾，可改善對極性化合物的吸附或拖尾；含碳量增高了，有利于不易保留化合物的分離；填料穩定性好了，組分的保留時(shí)間重現性就好。如果待分析的樣品屬酸性或堿性的化合物，選用填料經(jīng)端基封尾的色譜柱。
咨詢(xún)電話(huà)：0571-87212685
在線(xiàn)客服1號